本发明公开了一种南芥菜花叶病毒SYBR Green I实时荧光RT-PCR检测试剂盒及方法。本发明所提供的南芥菜花叶病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒中含有由一条反转录引物和两条扩增引物组成的引物组;所述反转录引物为序列表中序列1所示的单链DNA;所述两条扩增引物为序列表中序列2和序列3所示的两条单链DNA。实验证明,利用本发明所提供的用于检测南芥菜花叶病毒的引物组及其试剂盒所建立的SYBR Green I实时荧光RT-PCR方法具有良好的重现性、灵敏性、特异性和广谱性,适用于进出境口岸及农业生产上南芥菜花叶病毒的快速检测与监测。