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大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质研究
- 专利权人:
- 江南大学
- 发明人:
- 饶志明,李倩,徐美娟,夏海锋
- 申请号：
- CN201010176334.6
- 公开号：
- CN101864448A
- 申请日:
- 2010.05.19
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2010
- 代理人:
- 摘要：
- 以大肠杆菌基因组DNA为模板，扩增得到编码苹果酸脱氢酶(MDH)的基因，将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a上，在E.coliBL21(DE3)中用IPTG诱导表达，利用表达载体pET-28a上的6·His-Tag标记选用Ni柱亲和层析法纯化表达具有活性的苹果酸脱氢酶(MDH)。粗酶的比酶活为43U/mg，纯化后比酶活达到112.5U/mg，纯化倍数达2.62倍，回收率为59％。并对该酶的酶学性质进行了初步研究，其中反应最适pH值为6.0，在pH值2.0-6.0的酸性范围内稳定，反应最适温度为37℃，在42℃以下酶的稳定性较好。k+对酶有明显的激活作用，Ni2+、Co2+、Fe3+对酶稍有激活作用。Cu2+、Zn2+对酶有明显的抑制作用。Hg2+对酶有很强的抑制作用，酶活基本没有。酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235mmol/L，Vmax为0.47umol/L.min。酶学性质的研究为MDH的应用打下了良好的理论基础。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
