本发明公开了一条可与环丙沙星特异结合的核酸适配体及其应用,所述的核酸适配体的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明借助指数富集的配体筛选系统,利用人工偶联的环丙沙星磁珠进行结合筛选,再经过PCR扩增结合的核酸序列;经过多轮的富集筛选,最终得到可特异结合环丙沙星的核酸适配体;经过人工合成序列检测,此序列可特异结合环丙沙星,其检测限达10.18ng/ml。本发明的核酸适配体能够与环丙沙星特异性结合,但与喹诺酮类其它药物交叉反应性低于10%。利用本发明的核酸适配体能够快速建立检测环丙沙星药物的检测方法,通过相应检测标定物的偶联,可进行环丙沙星的快速定性和定量检测。