本发明提供一种大肠杆菌O157:H7的PCR检测引物及检测试剂盒,属于生物技术领域。试剂盒是一种运用特异性引物对检测样品中大肠杆菌O157:H7的快速技术,其步骤为:一,提取待检样品中的核苷酸;二,利用所述PCR试剂盒检测样品中的核苷酸,判断样品中是否含有大肠杆菌O157:H7。本发明的试剂盒针对性强,操作简便。其中引物对包括:由序列为5- atgaataagaatctcatc-3的上游引物SEQ ID NO.1和序列为5- tttcttctcgcagtttcg-3的下游引物SEQ ID NO.2组成的引物对。该套引物序列根据GenBank上大肠杆菌O157:H7独有的保守序列设计,具有很高的特异性和敏感性。