本发明公开了一种快速鉴定化妆品中驴、马及牛源性成分的引物、探针组合物以及包含该引物、探针组合物的试剂盒,该引物、探针组合物包括一对通用引物和四种Taqman探针,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1~7所示。本发明还公开了一种鉴定化妆品中驴、马及牛源性成分的多重荧光PCR检测方法,包括以下步骤:取待检测样品,提取DNA,然后利用上述引物、探针组合物或试剂盒对DNA进行PCR扩增,收集荧光信号,根据荧光信号判断待检测样品中是否含有驴、马及牛源性成分。本发明的检测技术,可有效避免PCR反应中假阴性结果,具有准确、稳定、操作简单、灵敏度极高、特异性强等优点。