本发明提供一种检测松鼠葡萄球菌的PCR引物、试剂盒及检测方法,涉及松鼠葡萄球菌检测技术领域。该松鼠葡萄球菌PCR检测引物,包括序列如SEQ ID NO.2所示的上游引物和如SEQ ID NO.3所示的下游引物。本发明还提供一种检测松鼠葡萄球菌的试剂盒及检测方法。该试剂盒包括所述松鼠葡萄球菌PCR检测引物。所述检测方法,包括如下步骤:以待检测样品DNA为模板,以所述引物进行PCR扩增,仅获得一个大小为214bp的目的片段,则待检测样品含有松鼠葡萄球菌。本发明检测引物、试剂盒及检测方法,用于检测松鼠葡萄球菌,特异性强、灵敏度高、成本低、耗时短。