本发明公开了一种用于鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha‑K61疫苗株的三重荧光定量PCR的引物、探针和试剂盒。本发明首先公开了用于鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha‑K61疫苗株的三重荧光定量PCR的引物及探针,其中引物序列为SEQ ID No.8‑9、SEQ ID No.14‑15所示,探针序列为SEQ ID No.1、4和6所示。本发明进一步公开一种三重荧光定量PCR检测试剂盒,该试剂盒基于三种标记不同荧光信号的TaqMan探针,可以准确鉴别伪狂犬病病毒经典株、变异株和Bartha‑K61疫苗株,具有良好的敏感性和特异性,能够应用于伪狂犬病病毒毒株的区别检测。