MAKEEV OLEG GERMANOVICH,Макеев Олег Германович,ULYBIN ALEKSEJ IGOREVICH,Улыбин Алексей Игоревич,ZUBANOV PAVEL SERGEEVICH,Зубанов Павел Сергеевич,ZVEREVA ANASTASIYA EVGENEVNA,Зверева Анастасия Евгеньев
申请号：
RU2014147935/15
公开号：
RU0002588835C1
申请日:
2014.11.27
申请国别(地区):
RU
年份:
2016
代理人:
摘要：
FIELD: medicine.SUBSTANCE: invention relates to medicine, specifically to biotechnology, and can be used for treating skin damages. Invention uses a tissue-engineered structure based on autologous fibroblast on biodegradable matrix and its application on wound. Fibroblasts transfected with, built ino plasmid vectors, genes hPOT1 (Adgene Plasmid 12387) and hPOT1 delta OB (Adgene Plasmid 13241) using a set of Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen) according to manufacturers protocol. Method then includes cultivation in DMEM with additionof 10 % FBS, 10 ng/ml FGF, 100 units/ml penicillin, 100 mcg/ml of streptomycin and 1 mcg/ml puramycin. During cultivation, transfected cells are selected according to resistance puramycin medium containing 1 mcg/ml puramycin.EFFECT: use of said tissue-engineered structure provides ectopic expression of telomerase genes, increases length of telomeres and high proliferative cell potential of biograft, wherein vectors function in fibroblasts of biograft for first 3-4 weeks after application, providing resistane of cells to aggressive wound content.3 cl, 11 tbl, 2 dwgИзобретение относится к медицине, а именно к области биотехнологий, и может быть использовано для лечения повреждений кожи. Для этого применяют тканеинженерную конструкцию на основе аутологичных фибробластов на биоразлагаемой матрице и ее наложение на рану. Фибробласты трансфецируют встроенными в плазмидные векторы генами hPOT1 (Adgene Plasmid 12387) и hPOT1 delta OB (Adgene Plasmid 13241) с использованием набора Lipofectamine™ 2000 (Invitrogen) согласно протоколу производителя. Затем культивируют в среде DMEM с добавлением 10% FBS, 10 нг/мл FGF, 100 ед/мл пенициллина, 100 мкг/мл стрептомицина и 1 мкг/мл пуромицина. Причем в процессе культивирования отбирают трансфецированные клетки по устойчивости к пуромицину в среде, содержащей 1 мкг/мл пуромицина. Использование данной тканеинженерной конструкции обеспечивает эктопическую экспрессию генов теломеразы, увеличение длины теломер и по
