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一种镰形扇头蜱的抗凝血分子Rhipilin-1的基因序列和重组表达与应用
- 专利权人:
- 中国农业科学院上海兽医研究所
- 发明人:
- 周金林,石磊,周勇志,李庄,向飞宇
- 申请号：
- CN200910053692.5
- 公开号：
- CN101928710B
- 申请日:
- 2009.06.24
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2012
- 代理人:
- 王巍
- 摘要：
- 本发明提供了镰形扇头蜱抗凝血分子Rhipilin-1的基因序列及其在大肠杆菌中的重组表达方法。通过构建镰形扇头蜱雌蜱吸血前后的唾液腺消减文库和测序分析，从镰形扇头蜱克隆到一个抗凝血分子Rhipilin-1的全长编码基因，核苷酸全长620bp，开放阅读框编码164个氨基酸残基，预测分子量为18kDa，在N-端有一个18个氨基酸构成的信号肽序列，并含有一个典型的Kunitz功能域，该分子与抗凝血分子之一的组织通道抑制因子显著同源。将该基因亚克隆到pGEX-4T-1表达载体，转化到BL21(DE3)宿主菌中，经IPTG诱导，重组GST融合蛋白以可溶性的形式高效表达。以纯化的重组蛋白进行兔血浆复钙时间和部分凝血酶激活时间实验，证实Rhipilin-1分子具有抗凝血生物活性，可用于制备抗凝血生物制剂。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
