本发明涉及动物疫苗技术领域,尤其是一种猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗粘膜免疫增强剂及制备工艺和应用,所述免疫增强剂为三价融合型蛋白质,由产肠毒素性大肠杆菌耐热肠毒素的STⅠ型、STⅡ型以及霍乱弧菌ST毒素组成,其基因核酸序列如SEQ ID No:1所示。该三价融合蛋白与佐剂乳化制备免疫原疫苗免疫动物,能刺激机体产生高滴度的抗体,免疫原性良好,克服了单个ST分子免疫原性差的弱点和不足。三价融合蛋白与猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗株联合使用,能够显著增强猪流行性腹泻病毒特异性sIgA抗体水平、延长其抗体持续期、降低哺乳仔猪的腹泻率和死亡率,是一种理想的猪流行性腹泻病毒弱毒疫苗佐剂。