本发明提供一种嗜碱性粒细胞活化的检测试剂盒及其使用方法,本发明的检测试剂盒包括洗涤液、刺激物对照品、带有荧光标记的嗜碱性粒细胞识别抗体、红细胞裂解液、抗体染色液;其中,所述带有荧光标记的嗜碱性粒细胞识别抗体中,嗜碱性粒细胞识别抗体为Anti human CD11b、Anti human CD123、Anti human CD203c和Anti human CD63,且不同的嗜碱性粒细胞识别抗体带有不同的荧光标记。采用本发明的试剂盒检测嗜碱性粒细胞活化情况可规避目前已知的嗜碱性粒细胞活化及检测的影响因素,全面、准确的识别和检测嗜碱性粒细胞活化情况,能更好服务于临床或科研上嗜碱性粒细胞活化的检测。