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一种split-TEV-Fast系统的构建方法及其在检测蛋白相互作用中的应用
- 专利权人:
- 湖北大学
- 发明人:
- 易犁,王婷,张桂敏,梅萌,王钦宏
- 申请号：
- CN201711193064.8
- 公开号：
- CN108048480A
- 申请日:
- 2017.11.24
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 杨立`陈璐
- 摘要：
- 本发明公开了一种基于酿酒酵母的split‑TEV‑Fast系统方法及其在检测蛋白互作中的应用，包括：1)构建载体pESD‑PPI，其含受半乳糖诱导的一个正向启动子和一个双向启动子，所述正向启动子用以表达TEV‑Fast蛋白酶底物与FLAG和HA标签序列，所述双向启动子用以表达拆分的TEV‑Fast蛋白酶和待测目的蛋白；2)用半乳糖同时诱导启动子，引发下游基因等量表达；3)利用分别识别FLAG和HA标签序列的荧光抗体对细胞进行标记；4)利用流式细胞仪检测细胞表面荧光信号，根据单双荧光信号判断蛋白之间相互作用的强度。本发明在TEV‑Fast蛋白酶及其底物‑COOH端使用不同强度的内质网滞留信号肽，可扩大检测蛋白互作的范围，并根据最终检测的单双荧光信号强度的比例分析蛋白互作的强弱。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
