The present invention relates to a novel artificial sgRNA having activity equal to or higher than that of natural sgRNA and improved in vivo stability, and an efficient CRISPR / Cas9 combining the artificial sgRNA and Cas9. Provide a system. Even if the nucleotide linker part for single-strand linking the 3 'end of crRNA and the 5' end of tracrRNA in sgRNA is replaced with an amino acid derivative linker, the original sgRNA can be obtained by in vitro DNA cleavage assay. The activity equal to or higher than is retained. Further, the linker region existing between stem-loop 1 and stem-loop 2 of tracrRNA and / or the loop portion of stem-loop 2 is replaced with an amino acid derivative linker, or the 5 ′ end and / or 3 ′ end of sgRNA Even if an amino acid derivative linker is added / inserted in the vicinity, the activity equal to or higher than that of the original sgRNA is retained. By introducing one or more amino acid derivative linkers into sgRNA, in vivo stability can be improved.本発明は、天然型sgRNAと同等もしくはそれ以上の活性を有し、かつ生体内での安定性が向上した新規な人工sgRNA、並びに、該人工sgRNAとCas9とを組み合わせた効率的なCRISPR/Cas9システムを提供する。sgRNA中の、crRNAの3’末端とtracrRNAの5’末端とを繋ぐ一本鎖化のためのヌクレオチドリンカー部分を、アミノ酸誘導体リンカーに置換しても、in vitroのDNA切断アッセイで、元のsgRNAと同等以上の活性が保持される。さらに、tracrRNAのステム-ループ1とステム-ループ2との間に存在するリンカー領域及び／又はステム-ループ2のループ部分をアミノ酸誘導体リンカーに置換、あるいはsgRNAの5’末端及び／又は3’末端近傍にアミノ酸誘導体リンカーを付加／挿入しても、元のsgRNAと同等以上の活性が保持される。1以上のアミノ酸誘導体リンカーがsgRNA中に導入されることにより、生体内での安定性を向上させることができる。
