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一种非转基因CRISPR突变体的制备方法
- 专利权人:
- 南京农业大学
- 发明人:
- 丁静,陈龙正,李威,洛伦佐·卡廷-格拉齐尼,李义
- 申请号：
- CN201810414408.1
- 公开号：
- CN108611364A
- 申请日:
- 2018.05.03
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2018
- 代理人:
- 徐冬涛`竞存
- 摘要：
- 本发明提供一种基于CRISPR‑Cas9技术的非转基因突变体的制备方法，具体的，包括构建方法和筛选方法。构建方法为将CRISPR‑Cas9及sgRNA预组装，定位在农杆菌的T‑DNA，通过农杆菌侵染目标植物及共培养，CRISPR‑Cas9及sgRNA的序列不需要整合到目标植物基因组里，就可实现目标植物的目的基因定点改变，使得到的目的基因定点改变的突变体材料，不需要经过有性生殖和后代分离群体筛选等过程，也不含有任何外源基因序列。本发明提供的高通量测序与高分辨率熔解曲线技术对得到的再生苗进行筛选，能够在转基因当代高效、快速地从再生苗中鉴定得到目的基因发生突变的突变体植株，即使是对突变体比例为混合群体1/100的低比例突变体筛选，本发明的筛选方法仍可保证优异的准确性和灵敏度。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
