Distribution image of molar concentration ratios of the first and second biological substances contained in the biological tissue having the first, second, third and fourth isosbestic points in order from the short wavelength side in the absorption spectrum in the predetermined wavelength region In which the first and second isosbestic points are divided by the first wavelength region and the second and third isosbestic points. Light extracted from white light by the first optical filter that selectively extracts the light in the third wavelength range divided by the second wavelength range and the third and fourth isosbestic points. Using the light extracted from the white light by the step of acquiring the first imaging data G1 by imaging the biological tissue using the second optical filter for selectively extracting the light in the second wavelength range To acquire the second imaging data G2 and the first imaging data G1 and Generating a distribution image based on the second imaging data G2, it is intended to include.所定の波長域における吸収スペクトルが短波長側から順に第1、第2、第3及び第4の等吸収点を有する生体組織に含まれる第1及び第2の生体物質のモル濃度比の分布画像を生成する方法であって、第1の等吸収点と第2の等吸収点とで区画された第1の波長域、第2の等吸収点と第3の等吸収点とで区画された第2の波長域及び第3の等吸収点と第4の等吸収点とで区画された第3の波長域の光を纏めて選択的に取り出す第1の光学フィルタにより白色光から取り出した光を用いて生体組織を撮像して第1の撮像データG1を取得するステップと、第2の波長域の光を選択的に取り出す第2の光学フィルタにより白色光から取り出した光を用いて生体組織を撮像して第2の撮像データG2を取得するステップと、第1の撮像データG1及び第2の撮像データG2に基づいて分布画像を生成するステップと、を含むものである。