本发明公开了一种遗传性耳聋易感基因20个位点分型检测试剂盒。该试剂盒包括了线粒体基因的1494 C>T、1555 A>G共2个位点,GJB2基因的35dleG、299‑300delAT、235delC、176‑191del19、167delT共5个位点,GJB3基因的547G>A、538C>T共2个位点,SLC26A4基因的281C>T、589G>A、IVS7‑2A>G、1174A>T、1226G>A、IVS15+5G>A、1975G>C、2027T>A、2162C>T、2168A>G共10个位点的PCR扩增引物和单碱基延伸引物,其序列分别如SEQ ID No:1~SEQ ID No:40所示。试剂盒分成两组分别20个位点进行扩增和检测,保证检测的准确率。实现了遗传性耳聋基因型检测的高效、低成本、高确度。