本发明涉及生物技术领域,尤其涉及一种重组白细胞介素18及其制备方法与应用。本发明提供的rhIL‑18在其N端第10位由丝氨酸突变为可羟基化的氨基酸残基,以如SEQ ID NO:1所示的hrIL‑18进行实验,其解决了野生型IL‑18溶解度低、稳定性差、生物活性低等缺点,而且如SEQ ID NO:1所示的hrIL‑18更易纯化,适合工业化生产。本发明提供的rhIL‑18能够抑制人内皮细胞微管的产生,且能够促进NK细胞的活性、促进IFN‑γ的形成;而对于人视网膜色素上皮细胞的活性不会产生影响,说明该rhIL‑18能够作为治疗眼底新生血管性疾病和/或恶性肿瘤的药物。