This fluorescence observation method is a method for observing a living organism into which a fluorescent dye is injected. The fluorescence observation method is provided with: a step for irradiating the living organism with excitation light including a wavelength for exciting the fluorescent dye using a light irradiation means； a step for acquiring a first fluorescence image of the living organism using an image acquisition means, the first fluorescence image being generated by the irradiation with the excitation light； a step for specifying an object to be observed in the living organism on the basis of the first fluorescence image； a step for acquiring a second fluorescence image of the object to be observed using the image acquisition means, the second fluorescence image being generated by the irradiation with the excitation light； and a step for specifying a linear fluorescence pattern appearing in the second fluorescence image.L'invention concerne un procédé d'observation de fluorescence consistant en un procédé d'observation d'un organisme vivant dans lequel un colorant fluorescent est injecté. Le procédé d'observation de fluorescence est pourvu : d'une étape pour l'irradiation de l'organisme vivant avec une lumière d'excitation comprenant une longueur d'onde pour exciter le colorant fluorescent à l'aide d'un système d'irradiation de lumière； une étape consistant à acquérir une première image de fluorescence de l'organisme vivant à l'aide d'un système d'acquisition d'image, la première image de fluorescence étant générée par l'irradiation avec la lumière d'excitation； une étape consistant à spécifier un objet à observer dans l'organisme vivant sur la base de la première image de fluorescence； une étape pour acquérir une seconde image de fluorescence de l'objet à observer à l'aide du système d'acquisition d'image, la seconde image de fluorescence étant générée par l'irradiation avec la lumière d'excitation； et une étape pour spécifier un motif de fluorescence
