本发明提供了一种新型L‑脯氨酸‑4‑羟化酶,其氨基酸序列如SEQ ID No.2所示,来源于Micromonospora sp.CNB394。本发明还提供一种高效表达上述L‑脯氨酸‑4‑羟化酶,从头合成高产反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸的基因工程菌E.coli HYP,该基因工程菌具有遗传稳定性好和发酵产酸能力较强的优势,不含质粒,利用基因组表达上述新型L‑脯氨酸‑4‑羟化酶,以葡萄糖等廉价碳源为底物从头高效合成反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸,发酵42h反式‑4‑羟基‑L‑脯氨酸产量高达51g/L,具有很好的工业应用前景。