Hepatitis C viruses (HCV) require host cell proteins for proliferation thereof. In order to verify cell factors essential to HCV proliferation, a siRNA library targeting a cell cycle was screened by using cells infected with HCV grown through cell proliferation, and a gene coding cyclin A was selected and characterized. CycA2 deregulation was associated with several types of tumors including liver cancer. The effects of CycA2 on HCV proliferation was studied by siRNA mediated knockdown assay, in vitro and in vivo protein binding assay, luciferase reporter gene assay, and immunoblotting assay. The siRNA-mediated CycA2 reduction remarkably inhibited HCV replication for both HCV sub-genomic replicon cells and cells infected with HCVcc. In addition, HCV NS5B specifically interacted with CycA2 in vivo and in vitro. The protein interaction was mediated through the cyclin box of CycA2 and the palm domain of NS5B. The R/HxL motif of the palm domain of NS5B mediates protein interaction with CycA2, and this interaction is essential in HCV replication. Further, tylophorine, which is a product of a natural plant and inhibits CycA2 activity, inhibited HCV replication. In conclusion, HCV regulates CycA2 through NS5B protein for self renewal, and tylophorine has a potential as a HCV therapeutic agent.배경과 목적: C형 간염 바이러스 (HCV)는 증식에 숙주세포 단백질을 필요로 한다. HCV 증식에 필수적인 세포인자를 확인하기 위해 세포증식으로 성장한 HCV에 감염된 세포를 이용하여 세포 사이클을 타겟으로 하는 siRNA 라이브러리를 스크린하였으며, 사이클린 A2를 코딩하는 유전자를 선택하고 특성을 규명하였다. CycA2 비조절 (deregulation)은 간암을 비롯한 여러 타입의 종양에 관련되어 있었다.방법: HCV 증식에 미치는 CycA2의 효과는 siRNA 매개 녹다운 분석, 인비트로 및 인비보 단백질 결합 분석, 루시퍼레이즈 리포터 유전자 분석 및 면역블랏팅 분석으로 연구하였다.결과: siRNA 매개 CycA2 감소는 HCV 서브게놈 레플리콘 세포 및 HCVcc 감염된 세포에서 모두 HCV 복제를 현저히 저해하였다. 또한, HCV NS5B는 인비트로와 인비보에서 CycA2와 특이적으로 상호작용하였다. 단백질 상호작용은 CycA2의 사이클린 박스와 NS5B의 팜 도메인을 통해 매개되었다. HCV NS5B의 팜 도메인의 R/HxL 모티프는 CycA2와의 단백질 상호작용을 매개하며, 이 상호작용은 HCV 복제에 필수적이다. 나아가, CycA2 저해 기능을 하는 천연 식물의 산물인 틸로포린은 HCV 복제를 억제하였다. 결론: HCV는 자기 증식을 위해 NS5B 단백질을 통해 CycA2를 조절하며, 틸로포린
