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一种高效结合IgG的重组蛋白A及其工程菌的构建方法
- 专利权人:
- 江南大学
- 发明人:
- 夏海锋,吴璞强,金雄华,饶志明
- 申请号：
- CN201110124915.X
- 公开号：
- CN102373225A
- 申请日:
- 2011.05.16
- 申请国别(地区):
- 中国
- 年份:
- 2012
- 代理人:
- 摘要：
- 本发明公开了一种高效结合IgG的重组蛋白A及其工程菌的构建方法。根据NCBI公布的基因序列对金黄色葡萄球菌蛋白A的IgG抗体结合区E、D、A、B、C区域设计重组蛋白A引物，并在C端引物中添加一个半胱氨酸密码子。以金黄色葡萄球菌的基因组为模板，扩增得到编码重组蛋白A抗体结合区的基因(spa)，将其与质粒pMD18-T连接，转化感受态E.coil JM109，得到大量重组质粒pMD18-T-spa，从而保存基因和增加基因的拷贝数。提取重组质粒，用Noc I和BamH I对重组质粒和质粒pET-28a进行双酶切，连接重组质粒pET-28a-spa，转化感受态E.coil BL21，添加终浓度1mmol/L的IPTG于30℃诱导表达，经SDS-PAGE验证表达成功。
- 来源网站：
- 中国工程科技知识中心
- 来源网址：
- http://www.ckcest.cn/home/
