本发明涉及基因技术和植物学领域,旨在提供调控烟草尼古丁合成和转运相关的非编码microRNA(miRNA)基因。该用于调控烟草尼古丁合成和转运的基因,该基因的序列是SEQ ID NO:1-6中的任意一种。本发明取得的6个基因可以形成稳定的发夹结构,获得的烟草非编码小RNA序列分析表明部分小RNA来自其茎部序列。这些小RNA预测其靶基因分别靶向烟草尼古丁合成和转运关键蛋白质编码基因。本发明取得的miRNA调控机制,将为烟草尼古丁合成和转运途径关键基因所扮演的角色提供一个更加深入的理解,以便可以更好的改良烟草尼古丁含量性状。