本发明公开了一对筛选乳腺炎抗性奶牛的引物:上游引物的序列如SEQ ID NO.7所示,下游引物的序列如SEQ ID NO.8所示。本发明还公开了一种筛选乳腺炎抗性奶牛的试剂盒,包括上述引物,以及PCR扩增所需常规试剂。本发明的引物和试剂盒可以用于筛选乳腺炎抗性奶牛,应用方法为:提取待检测奶牛的基因组DNA,利用上述引物进行特异性PCR扩增,对PCR扩增产物进行检测,以判断基因型;杂合型具有较强的乳腺炎抗性,因此,选择基因型为杂合型的奶牛个体用于奶牛遗传分子育种。本发明的方法提高了奶牛乳腺炎抗性个体选择的准确性,节省了奶牛乳腺炎抗性遗传改良时间,具有良好的应用前景。