本发明提供了一种基因敲除载体、制备CD13基因敲除的猪成纤维细胞或基因编辑猪的方法、由上述方法制备而成的CD13敲除的猪成纤维细胞。本发明所述基因敲除载体包括基因编辑载体骨架以及连接到该载体骨架上的一段DNA片段,所述载体骨架选自CRISPR/Cas9、CRISPR/Cas9n、CRISPR/Cpf1或CRISPR/C2c2,所述DNA片段的核苷酸序列如SEQ ID NO:1‑3任一项所示,优选地,如SEQ ID NO:1所示。通过本发明上述载体和方法可以快速、准确地将CD13基因敲除,获得CD13基因纯合敲除、且不带有外源标记基因的猪成纤维细胞或基因编辑猪,可以为猪流行性腹泻提供研究平台,同时具有极高的抗病育种价值。