本发明公开一种乙型脑炎病毒弱毒株重组感染性克隆质粒,包含乙型脑炎病毒弱毒株10S3的全长基因组cDNA序列,或乙型脑炎病毒弱毒株10S3的全长基因组cDNA序列内部引入标记性酶切位点的全长cDNA序列。本发明还公开了一种乙型脑炎病毒感染性克隆弱毒株,该弱毒株是乙型脑炎病毒弱毒株10S3的克隆毒株,所述弱毒株10S3的全长基因cDNA序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的乙型脑炎病毒弱毒株重组感染性克隆质粒,在细胞上拯救出的乙型脑炎病毒感染性克隆弱毒株,在免疫动物后能对动物抵抗乙型脑炎病毒提供完全的免疫保护,非常有利于乙型脑炎病毒的预防和控制。