The present invention relates to molecular biology applied to reproductive biotechniques and provides a method of quantifying the levels of microRNAs in cryopreserved bovine sperm to diagnose the quality of these cells. The quantification of these microRNAs directly involved in sperm maturation, cell death and mitochondrial functionality, can be used for the identification of ejaculates containing sperm with the recommended quality standard for use both in the area of scientific research, and especially in the commercial area of in vitro embryos. The molecular diagnosis of sperm quality through the quantification of microRNA levels increases the accuracy and provides greater robustness to the conventional tests currently used for analysis of cryopreserved semen.a presente invenção refere-se a biologia molecular aplicada a biotécnicas reprodutivas e proporciona um método de quantificação dos níveis de micrornas em espermatozoides bovinos criopreservados para diagnóstico da qualidade destas células. a quantificação destes micrornas envolvidos diretamente à maturação espermática, morte celular e funcionalidade mitocondrial, pode ser usada para a identificação de ejaculados contendo espermatozoides com padrão de qualidade recomendado para o emprego tanto na área da pesquisa científica, e principalmente, na área comercial de produção de embriões in vitro. o diagnóstico molecular da qualidade espermática através da quantificação dos níveis dos micrornas aumenta a acurácia e provém maior robustez aos testes convencionais utilizados atualmente para análise de sêmen criopreservado.