本发明公开了一种胸腺素α1‑猪干扰素α融合蛋白基因及其重组蛋白的制备方法。本发明的经改造后的胸腺素α1‑猪干扰素α融合蛋白基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,本发明同时公开了该基因表达的重组蛋白制备及活性检测的方法,具体涉及胸腺素α1‑猪干扰素α融合蛋白基因的改造、基因的克隆及其在毕赤酵母中的分泌表达、重组蛋白的制备和发酵培养条件,以及活性检测方法等操作方法的改进等步骤。本发明简单易行,成本较低,实现了胸腺素α1‑猪干扰素α融合蛋白在毕赤酵母中高效稳定分泌表达,表达的重组融合蛋白具有高水平的抗病毒活性和调节免疫细胞活性,为提供具有治疗猪病毒性疾病及免疫调节功能的绿色无残留生物制品奠定了基础。