本发明属于基因工程技术领域,公开了一种核桃黑斑病菌实时荧光PCR特异性检测引物及方法,采用核桃黑斑病菌X.campestris pv.实时荧光PCR特异性检测体系扩增核桃黑斑病菌X.campestris pv.的特异性基因序列,利用Premix Ex TaqⅡ与双链DNA结合后发出荧光的特性,检测反应体系中的Premix Ex TaqⅡ与DNA结合后发出的荧光,检测PCR产物扩增量;通过特异性引物,引发特异性扩增,通过荧光信号收集处理,获得特异性扩增曲线。本发明特异性引物设计合理,用于核桃黑斑病菌X.campestris pv.检测,特异性好,检测灵敏度高。