The present invention relates to a ribosomal DNA nontranscribed spacer (rDNA NTS)-based gene multiplex cassette set and a GRAS-grade recombinant yeast strain using the same, and more particularly, to a recombinant yeast strain having an rDNA NTS fragment and an incomplete promoter The present inventors developed a recombinant strain for oral use which does not have an antibiotic resistance marker by developing a gene multiplex insertion cassette containing a selection marker and multiplexing it into an optimal number of chromosomes of Saccharomyces cerevisiae strain. In addition, the present invention provides a vaccine composition comprising the strain, the culture thereof, the cell lysate, or the Nodavirus Capsid Protein (NNV) isolated and purified therefrom as an active ingredient. The present invention also provides a composition for feed addition comprising the above strain, culture thereof, cell lysate, or squalene or oxidosqualene isolated and purified therefrom as an active ingredient. Furthermore, the present invention provides a technique for producing a GRAS-class recombinant yeast strain that mass-produces various recombinant proteins or useful metabolites.본 발명은 리보좀 DNA 비전사 지역(ribosomal DNA nontranscribed spacer rDNA NTS) 기반 유전자 다중 삽입 카세트 세트 및 이를 이용한 GRAS 등급의 재조합 효모 균주에 관한 것으로서, 상세하게는 rDNA NTS 단편과 불완전 프로모터를 가진 영양요구성 선택 마커를 포함한 유전자 다중 삽입 카세트를 개발하고, 이를 사카로마이세스 세레비시애 균주의 염색체상으로 최적의 수로 다중 삽입함으로써 항생제 내성 마커를 지니지 않은 안전한 경구용 재조합 균주를 제작하는 것이다. 또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양물, 균체 파쇄물 또는 이로부터 분리 정제된 노다바이러스 캡시드 단백질(NNV)을 유효성분으로 포함하는 백신 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양물, 균체 파쇄물 또는 이로부터 분리 정제된 스쿠알렌(squalene) 또는 옥시도스쿠알렌(oxidosqualene)을 유효성분으로 포함하는 사료 첨가용 조성물을 제공한다. 더 나아가 본 발명은 다양한 재조합 단백질 또는 유용 대사산물을 대량 생산하는 GRAS급의 재조합 효모 균주를 제작할 수 있는 기술을 제공한다.
