本发明提供了一种马铃薯金线虫检测用引物和探针,本发明还进一步提供了检测马铃薯金线虫的检测方法。本发明通过分析已报道马铃薯金线虫ITS序列的基础上,分别设计引物和荧光探针。所述的引物对由正向和反向引物组成,其核苷酸序列分别为正向引物SEQ ID No.1(FP)和反向引物SEQ ID No.2(RP),所述探针核苷酸序列为SEQ ID No.3(LP)。本发明还进一步给出了应用上述引物和探针的荧光PCR检测方法,其以样品总DNA为模板,反应结束后根据扩增曲线判定结果。本发明探针特异性好,检测方法快速简单,准确性高,灵敏度高,为进口马铃薯种薯安全提供了保证。