本发明公开了一种犬瘟热、犬细小病毒病、狂犬病三联亚单位疫苗,属于兽用生物制品领域。本发明的亚单位疫苗是以重组犬瘟热病毒H蛋白、重组犬细小病毒VP2蛋白以及重组狂犬病病毒G蛋白作为抗原,是通过三种重组杆状病毒分别感染昆虫细胞后,经提纯处理制备而成。所述的重组杆状病毒都携带有提高蛋白表达的元件,其核苷酸序列为SEQ ID NO:1;重组犬瘟热病毒H蛋白、重组犬细小病毒VP2蛋白以及重组狂犬病病毒G蛋白都是经昆虫细胞密码子优化后的序列,其核苷酸序列分别为SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4。本发明制备的亚单位疫苗免疫犬后能够快速产生特异性抗体,可用于预防犬的犬瘟热病毒、犬细小病毒以及狂犬病病毒的感染。