本发明属于猪的动物生物技术与育种领域,具体涉及猪异柠檬酸脱氢酶基因IDH3β的启动子的克隆、活性分析和启动子区突变研究。本发明的步骤包括:从猪血液中提取基因组DNA,设计引物,采用TAIL-PCR技术经过两轮扩增获得猪IDH3β基因上游5’侧翼2447bp的基因组碱基序列,并进行序列比较分析和遗传变异检测;采用5’端缺失策略扩增IDH3β基因上游5’侧翼区,将获得的DNA序列构建荧光素酶报告基因载体,测定其启动子活性,鉴定IDH3β基因启动子。本发明克隆的猪异柠檬酸脱氢酶基因IDH3β的启动子的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:4所示。本发明为猪的遗传改良应用提供了基因资源。