本发明提供一种敲除水稻OsMAP65‑3.1(LOC_Os05g47970)基因的两个sgRNA。针对水稻OsMAP65‑3.1基因设计两个基于CRISPR/Cas9的sgRNA序列,将含有编码所述sgRNA序列的DNA片段连接到携带CRISPR/Cas9的载体中,通过农杆菌转化水稻,实现对水稻OsMAP65‑3.1基因的敲除。其中,sgRNA作用位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.1与SEQ ID NO.2所示。本发明通过CRISPR‑CAS9技术对水稻内源基因OsMAP65‑3.1进行编辑,获得了两种OsMAP65‑3.1‑1、OsMAP65‑3.1‑2敲除突变体。利用本发明制备的sgRNA能高效、快速、精确靶向水稻OsMAP65‑3.1基因,在基础研究(水稻有丝分裂)和生产实践(水稻高产育种和抗逆育种)上具有一定的意义。