conjugation of the cytotoxic to a cell-binding molecule with a bis-ligand (double ligand) as shown in formula (i) is provided. bis-coupling methods of preparing a conjugate of a cytotoxic drug molecule to a cell-binding agent in a specific manner are provided. it also refers to the application of conjugates for the treatment of cancer, or an autoimmune disease, or an infectious disease.é provida a conjugação de citotóxico a uma molécula de ligação celular com um bis-ligante (ligante duplo) como mostrado na fórmula (i). são providos métodos de bis-acoplamento de preparação de um conjugado de uma molécula de fármaco citotóxico a um agente de ligação celular de uma maneira específica. também se refere à aplicação dos conjugados para o tratamento de um câncer, ou uma doença autoimune, ou uma doença infecciosa.