Methods and compositions are provided for making one or more targeted genetic modifications at a target genomic locus within a cell and for producing non-human animals comprising the modified genomic locus. The methods employ two or more large targeting vectors which are capable of recombining with each other and with the target genomic locus in a single genomic targeting step. The methods may also be employed in combination with a nuclease agent. Methods and compositions are also provided for enhancing homologous recombination at a target genomic locus in a cell. The methods employ two or more nucleic acids comprising one or more overlapping sequences. The methods may be employed in combination with a nuclease agent or without a nuclease agent.Cette invention concerne des procédés et des compositions permettant de réaliser une ou plusieurs modifications génétiques ciblées au niveau dun locus génomique cible à lintérieur dune cellule et de produire des animaux non humains comprenant le locus génomique modifié. Ces procédés font appel à deux ou plusieurs grands vecteurs de ciblage aptes à se recombiner les uns avec les autres et avec le locus génomique cible dans une seule étape de ciblage génomique. Ces procédés peuvent également être utilisés en combinaison avec un agent de nucléase. Linvention concerne également des procédés et des compositions fournis pour améliorer la recombinaison homologue au niveau dun locus génomique cible dans une cellule. Ces procédés consistent à utiliser au moins deux acides nucléiques comprenant une ou plusieurs séquences de chevauchement. Ces procédés peuvent être utilisés en combinaison avec un agent de nucléase ou sans un agent de nucléase.
