本发明公开了一种用于巢式PCR检测核桃炭疽病致病菌胶胞炭疽菌的特异性引物及其应用,它由第一轮引物对和第二轮引物对构成,其中,第一轮引物对的上游引物序列如SEQ ID No.1所示,第一轮引物对的下游引物序列如SEQ ID No.2所示,第二轮引物对的上游引物序列如SEQ ID No.3所示,第二轮引物对的下游引物序列如SEQ ID No.4所示。采用本发明提供的方法和试剂盒,可以检测特定材料是否被核桃炭疽病致病菌胶胞炭疽菌侵染,也可以针对核桃种植区进行核桃炭疽病危害的预警,防治核桃炭疽病大面积传播造成的农业经济损失。本发明的方法及试剂盒具有快速高效,易于实现,敏感可靠等优点,可在一天内完成多个待考察地区的检测或预警。