本发明提供了靶向miR‑29b的gRNA、AAV8‑CRISPR/Cas9系统及其应用,属于基因工程技术领域。本发明提供了靶向miR‑29b的gRNA,其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。gRNA在细胞水平上对miR‑29b具有较强的特异性结合能力,仅对miR‑29b具有靶向编辑作用,对于同家族的miR‑29a和miR‑29c没有影响,且具有更强的编辑效率,能有效抑制miR‑29b的表达。一种包含所述的gRNA靶向miR‑29b的AAV8‑CRISPR/Cas9系统。靶向miR‑29b的gRNA或AAV8‑CRISPR/Cas9系统在制备治疗肌肉萎缩的药物中的应用。