Provided is a method of screening an glyphosate-tolerant EPSPS gene. In this method, a high-throughput screening on microorganisms is performed by using a medium containing glyphosate, and thus the glyphosate-tolerant EPSPS gene can be screened, isolated and analyzed in a short time. Provided also is use of the resistance gene screened by using the method for screening the glyphosate-tolerant EPSPS gene in cultivation of glyphosate-tolerance plant varieties.L'invention concerne un procédé de criblage d'un gène EPSPS tolérant au glyphosate. Dans ce procédé, un criblage à haut débit sur des micro-organismes est effectué à l'aide d'un milieu contenant du glyphosate, et ainsi le gène EPSPS tolérant au glyphosate peut être criblé, isolé et analysé en peu de temps. L'invention porte également sur l'utilisation du gène de résistance criblé au moyen du procédé de criblage de gène EPSPS tolérant au glyphosate dans la culture de variétés de plantes à tolérance au glyphosate.