本发明涉及植物基因工程领域,具体的说是一种植物双价表达载体及其构建方法。植物双价表达载体序列表SEQ ID No.1中的碱基序列所示,其为β-胡萝卜素酮化酶基因和β-胡萝卜素羟化酶基因共同插入到同一表达载体上,得到的植物双价表达载体。构建为从雨生红球藻中克隆bkt和crtR-B基因;将bkt基因连接到pBI221载体上;酶切连有bkt基因的pBI221载体,得到35S-bkt-NOS片段,然后将此片段插入到pCAMBIA1301载体上;最后,将crtR-B基因插入到含有bkt片段的pCAMBIA1301载体上,得到含bkt和crtR-B基因的植物双价表达载体,将该载体转化高等植物,可以充分利用植物中β-胡萝卜素前体物质高效合成虾青素。