федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Казанский (Приволжский) федеральный университет" (ФГАОУВПО КФУ) (RU)
发明人:
Гаранина Екатерина Евгеньевна (RU),Ризванов Альберт Анатольевич (RU),Салафутдинов Ильнур Ильдусович (RU),Киясов Андрей Павлович (RU)
申请号：
RU2015100445
公开号：
RU2015100445A
申请日:
2015.01.12
申请国别(地区):
RU
年份:
2016
代理人:
摘要：
1. A method for obtaining a multicistronic cassettes in design VEGF165-FGF2, comprising of genes basic fibroblast growth factor and vascular endothelial growth factor (165 amino acid isoform), characterized in that it further comprises an amino acid sequence 2A-furinovoy site with protease (FuP2A) with possibility to achieve full-translational cleavage and release equimolar proteins, namely cassette VEGF165-FuP2A-FGF2.2. Genetic engineering multicistronic construction, a plasmid expression adenoviral vector pAd / CMV / V5-DEST, wherein cloned by recombination sites attB1 and attB2 cassette VEGF165-FuP2A-FGF2.3. Recombinant replication defective adenovirus serotype 5 produced using genetic engineering structure of claim. 2 by linearizing genetic construct pAd-VEGF165-FuP2A-FGF2 enzyme PacI, followed by adenovirus production in HEK 293 cells, followed by concentration to obtain the pharmaceutical composition.1. Способ получения мультицистронной конструкции в виде кассеты VEGF165-FGF2, содержащую в составе гены основного фактора роста фибробластов и сосудистого эндотелиального фактора роста (изоформа 165 аминокислот), отличающийся тем, что дополнительно содержит 2A-аминокислотную последовательность с сайтом фуриновой протеазы (FuP2A) с возможностью обеспечения полного ко-трансляционного расщепления и эквимолярного выхода белков, а именно кассету VEGF165-FuP2A-FGF2.2. Генно-инженерная мультицистронная конструкция, представляющая собой экспрессионный плазмидный аденовирусный вектор pAd/CMV/V5-DEST, в котором клонирована по сайтам для рекомбинации attB1 и attB2 кассета VEGF165-FuP2A-FGF2.3. Рекомбинантный репликационно дефектный аденовирус серотипа 5, полученный с применением генно-инженерной конструкции по п. 2 путем линеаризации генетической конструкции pAd-VEGF165-FuP2A-FGF2 ферментом PacI с последующей продукцией аденовируса в клетках НЕК293А и последующим концентрированием для получения фармацевтической композиции.
