A method of generating corrected fluorescence data of concentrations of a targeted fluorophore in tissue of a subject includes administering first and second fluorescent contrast agents to the subject, the first contrast agent targeted to tissue of interest, the second agent untargeted. The tissue is illuminated with light of a first stimulus wavelength and first data is acquired at an appropriate emissions wavelength； the tissue is illuminated at a second stimulus wavelength and second data is acquired at a second emissions wavelength associated with the second agent, the first and second emissions wavelength differ. Difference data is generated by subtracting the second data from the first data. A system provides for stimulus and capture at multiple wavelengths, with image storage memory and subtraction code, to perform the method. Corrected data may form an fluorescence image, or is used to generate fluorescence tomographic images.L'invention concerne un procédé de génération de données de fluorescence corrigées de concentrations d'un fluorophore ciblé dans un tissu d'un sujet, ledit procédé comprenant l'administration de premier et second agents de contraste fluorescents au sujet, le premier agent de contraste étant ciblé vers le tissu d'intérêt, le second agent non ciblé. Le tissu est éclairé par de la lumière d'une première longueur d'onde de stimulus et des premières données sont acquises à une longueur d'onde d'émissions appropriée ； le tissu est éclairé à une seconde longueur d'onde de stimulus et des secondes données sont acquises à une seconde longueur d'onde d'émissions associée avec le second agent, les première et seconde longueurs d'onde d'émissions étant différentes. Les donnée de différence sont générées par soustraction des secondes données des premières données. Un système fournit le stimulus et la capture à de multiples longueurs d'onde, ainsi qu'une mémoire de stockage d'image et un code de soustraction, pour effectuer le procédé. Les données co
