MURPHY ANDREW J,アンドリュー ジェイ． マーフィー,YANCOPOULOS GEORGE D,ジョージ ディー． ヨンコポウロス,アンドリュー ジェイ. マーフィー,ジョージ ディー. ヨンコポウロス
申请号：
JP2012269458
公开号：
JP2013090631A
申请日:
2012.12.10
申请国别(地区):
JP
年份:
2013
代理人:
摘要：
PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a quick and convenient method allowing use of a targeting vector including a large homologous region for modifying endogenous genes or chromosomal loci in eukaryotic cells.SOLUTION: There is provided the method for genetically-modifying endogenous genes or chromosomal loci in eukaryotic cells. The method comprises: (a) a step of obtaining a large cloned genomic fragment containing a DNA sequence of interest； (b) a step of using bacterial homologous recombination to genetically modify the large cloned genomic fragment of (a) to create a large targeting vector for use in the eukaryotic cells (LTVEC)； (c) a step of introducing the LTVEC of (b) into the eukaryotic cells to modify the endogenous gene or chromosomal locus in the cells； and (d) a step of using a quantitative assay to detect modification of allele in the eukaryotic cells of (c) to identify those eukaryotic cells in which the endogenous gene or chromosomal locus has been genetically modified.【課題】真核生物細胞における内因性遺伝子および染色体座を改変するために、大きな相同性領域を含む標的化ベクターの使用を可能にする迅速かつ便利な方法を提供すること。【解決手段】真核生物細胞において内因性遺伝子または染色体座を遺伝子改変する方法。この方法は、ａ）目的のＤＮＡ配列を含む大きなクローン化されたゲノムフラグメントを得る工程；ｂ）細菌相同組み換えを使用して（ａ）の大きなクローン化されたゲノムフラグメントを遺伝子改変し、真核生物において使用するための大きな標的化ベクター（ＬＴＶＥＣ）を作製する工程；ｃ）（ｂ）のＬＴＶＥＣを真核生物細胞に導入して、この細胞中の内因性遺伝子または染色体座を改変する工程；ならびにｄ）（ｃ）の真核生物細胞において対立遺伝子の改変を検出するために定量アッセイを使用して、内因性遺伝子または染色体座が遺伝子改変された真核生物細胞を同定する工程を包含する。【選択図】なし
