本发明公开了一种用于快速检测唐氏综合征无重复片段的FISH探针、试剂盒及其制备方法,该FISH探针以人类全基因组为模板,利用105对特异性的引物对进行PCR扩增反应而得,所述105对引物对的序列为:SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.210。本发明的FISH探针应用于制备快速检测唐氏综合征的试剂或试剂盒中,相对于传统的BAC FISH,不包含重复序列,反应体系中不需使用封闭DNA,背景更低;探针中所包含的短片段在进行杂交时较长片段(如基于BAC细菌人工染色体)所需的时间更短;本发明所述的FISH探针可以很好检测出21号染色体异常,具有反应快速的特点,能够应用于唐氏综合征快速检测。