本发明涉及黄曲霉毒素纳米抗体免疫吸附剂、免疫亲和柱及其制备方法和应用。本发明免疫吸附剂包括固相载体和与该固相载体偶联的黄曲霉毒素B1纳米抗体2014AFB-G15,所述黄曲霉毒素B1纳米抗体2014AFB-G15对黄曲霉毒素B1的50%抑制浓度IC50 为0.66ng/mL,对黄曲霉毒素B2、G1、G2、M1的交叉反应率分别为22.6%、10.95%、32.1%和26%;其氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示,编码基因序列如SEQ IDNO:8所示,本发明黄曲霉毒素纳米抗体免疫亲和柱可用于净化与浓缩上机检测前样品提取液,且该免疫亲和柱可以多次重复使用。