PURPOSE: A long-term conservation method of entomopathogenic nematode and an entomopathogenic nematode using the same are provided, which can keep entomopathogenic nematode for a long time by increasing trehalose component. CONSTITUTION: A long-term conservation method of entomopathogenic nematode comprises: a first process of preparing glycerol solution of 6-25 % concentration; a second process of manufacturing nematode suspension by pretreating nematode at 10-15 deg.C for 10-12 hours after inoculating entomopathogenic nematode with the prepared glycerol solution; and a third process of keeping nematode at 15-30 deg.C after putting the nematode into a container.본 발명은 곤충병원성선충의 장기 보관방법 및 이에 따른 곤충병원성선충에 관한 것이다. 보다 구체적으로는, 글리세롤 용액을 이용하여 곤충병원성선충을 전처리함으로써 곤충병원성선충 체내의 트레할로스 성분을 증가시키는 것을 특징으로 하는 곤충병원성선충의 장기 보관방법 및 이에 따른 곤충병원성선충에 대한 것이다.상기한 본 발명에 따르면 곤충병원성선충의 병원성을 해치지 않으면서도 생존율을 높여 장기간 보관될 수 있게 하는 효과가 있다. 특히, 기타 비목적성 곤충에 대해서는 안전하면서도, 해충에 대해서는 화학 살충제가 도달하기 어려운 토양 속 유충까지 스스로 찾아내 환경오염이나 생태학적 부작용없이 효율적으로 사멸시킬 수 있는 능력을 가진 상태로 곤충병원성선충을 장기 보관할 수 있다.