本发明属于生物工程领域，涉及一种新型内切葡聚糖酶RuCelB、其编码基因、制备方法与应用。RuCelB含有SEQ ID NO.2的第25-336位的氨基酸残基序列。通过对牦牛瘤胃微生物宏基因组cosmid文库的活性筛选，获得能够水解羧甲基纤维素钠的阳性克隆，进一步通过构建亚克隆、测序、同源比对的方法获得RuCelB的全长cds序列；重组表达获得RuCelB。RuCelB以羧甲基纤维素钠为底物的比活高达158.8U/mg，对滤纸、纤维三糖等底物也具有降解能力。本发明的RuCelB可广泛应用于纤维素的降解，包括纤维素生物转化、化工、纺织、食品、生物能源、饲料添加、医药工业方面应用等领域。
