PURPOSE: A method for activating NK cells using a composition is provided to negatively control target cytocidability of NK cells. CONSTITUTION: A method for preparing NK cells with enhanced cytotoxicity comprises a step of transducing an expression vector to NK cells under in vitro condition. The expression vector contains a nucleic acid sequence encoding miR-27a* inhibitor having a base sequence of sequence number 17. The method additionally comprises a step of confirming increase of Prf1 and GzmB protein expression in the NK cells. A pharmaceutical composition for preventing or treating cancer contains the NK cells with enhanced cytotoxicity as an active ingredient.본 발명은 NK 세포(natural killer cell; NK cell) 활성화용 조성물 또는 상기 조성물을 이용하여 NK 세포를 활성화시키는 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 NK 세포에서 miR-27a*이 Prf1 및 GzmB 단백질 발현 결합 부위 서열 특이적으로 조절하여 NK 세포의 표적 세포 살상능을 음성적으로 조절하는 것을 확인하였으므로, miR-27a*의 발현 또는 활성을 억제하는 조성물을 NK 세포의 세포 살상능 증진용 조성물로 유용하게 사용할 수 있으며, 상기 조성물을 이용하여 활성화된 NK 세포는 암의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.