Multispectral imaging of samples, in particular of biological tissues. A method for acquisition of fluorescence images and reflection images of an object including alternatingly illuminating the object with at least a first light and a second light, wherein the first light and the second light are spectrally shaped such that at least one light has several spectral regions of high light intensity separated by spectral region(s) of low light intensity, wherein the spectral regions of the first light and the second light with high intensity at least partially do not overlap and wherein at least one of the two lights has at least one region of low light intensity that is of longer wavelength to the neighboring region of high light intensity, and recording at least a first image of the object and a second image of the object while illuminating the object with at least one of the lights.La présente invention concerne l'imagerie multispectrale d'échantillons, en particulier de tissus biologiques. L'invention concerne en outre un procédé pour l'acquisition d'images par fluorescence et par réflectance d'un objet (400), comprenant les étapes consistant à éclairer de façon alternée l'objet (400) avec au moins une première lumière ayant plusieurs régions spectrales de forte intensité, la première lumière ayant au moins une région de faible intensité qui a une longueur d'onde plus longue qu'une région de forte intensité, et avec au moins une seconde lumière ayant au moins une région spectrale de forte intensité, à enregistrer une première image de l'objet pendant l'éclairage de l'objet avec la première lumière et une seconde image de l'objet pendant l'éclairage de l'objet avec la seconde lumière à l'aide d'un réseau de capteurs communs (200), la lumière enregistrée par le réseau de capteurs (200) étant atténuée dans au moins une des régions spectrales dans lesquelles la première lumière présente de fortes intensités.
