本发明提供一种抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体及其识别的B细胞表位和应用,涉及生物技术领域。分泌抗兔出血症病毒VP60蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株5H3,保藏号为CCTCC NO:C2015150。本发明所述单克隆抗体所识别的B细胞表位,氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还要求保护所述单克隆抗体、B细胞表位在制备用于诊断、预防或治疗兔出血症病毒的药物中的应用。本发明杂交瘤细胞株,能够稳定、高效分泌所述单克隆抗体。本发明单克隆抗体具有阻断RHDV VLPs与受体HBGAs结合的能力,所述单克隆抗体识别的B细胞表位能够与受体HBGAs结合,为病毒与受体HBGAs的一个结合位点。