The present invention relates to a method for preparing commercial scale quantities of human functional beta cells and to the establishment of cell lines from non- foetal pancreatic tissues. It also relates to a method of diagnosis using beta cell tumors or cells derived thereof. The method comprises sub-transplantation procedure to enrich the graft in proliferating beta cells, allowing to generate human Beta cell lines. Such lines express, produce and secrete insulin upon glucose stimulation. They have a gene expression profile that resembles to adult beta cells. In addition, the human beta cell lines are able to normalize glycemia of diabetic mice when transplanted, demonstrating their insulin secretion capabilities.Linvention concerne une méthode de préparation à grande échelle de cellules Bêta humaines fonctionnelles et létablissement de lignées cellulaires à partir de tissus pancréatiques non fœtaux. Linvention concerne également une méthode de diagnostic utilisant des tumeurs de cellules Bêta ou des cellules qui en sont dérivées. La méthode comprend une procédure de sous-transplantation pour enrichir le greffon en cellules Bêta proliférantes, permettant de générer des lignées cellulaires Bêta humaines. Ces lignées cellulaires expriment, produisent et sécrètent de linsuline sous leffet de la stimulation de glucose. Elles ont un profil dexpression génique qui ressemble aux cellules Bêta de ladulte. En outre, les lignées cellulaires Bêta humaines peuvent normaliser la glycémie de souris diabétiques quand elles sont transplantées, démontrant leur capacité de sécrétion dinsuline.